吉非替尼(Gefitinib)能抑制博来霉素诱导的肺纤维化

　　肺纤维化（PF）是一种威胁生命的间质性肺疾病。在这项研究中，我们试图揭示高迁移率组框 1 (HMGB1) 和α-平滑肌肌动蛋白 (α-SMA) 之间的作用模型以及吉非替尼（Gefitinib）在博来霉素气雾剂给药诱导的肺纤维化中的保护作用。老鼠。对于机制研究，在建模后两周收集肺组织，通过免疫组织化学和免疫荧光染色检测 HMGB1 和α -SMA 的共表达。使用下拉法分析蛋白质-DNA 相互作用以研究 HMGB1 和α之间的关系-SMA。对于吉非替尼治疗研究，将小鼠分为三组：磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 对照组、PBS 治疗的 PF 组和吉非替尼治疗的 PF 组。在博来霉素处理两周后进行吉非替尼或 PBS（20 mg/kg/天）的管饲，直至处死小鼠。收集肺和血液样本，评估组织学变化、氧化应激和 NOXs、HMGB1、EGFR、MAPKs、AP-1 和 NF-κB 的表达，以确定疗效和相关分子机制。结果显示，在纤维化肺的一些间质细胞中，α- SMA 和 HMGB1 的高共表达。DNA-蛋白质下拉分析证明 HMGB34367 是一种新的α转录因子-SMA 发起人并参与了肺纤维化的最终发展。其次，吉非替尼可显着降低肺纤维化变化和MDA水平，恢复T-AOC水平。同时，吉非替尼还可以降低纤维化组织中 NOX1/2/4、HMGB1、p-EGFR、p-ERK、p-JNK、p-P38、p-NF-κB、pc-Jun 和 pc-Fos 的表达水平肺。本研究表明，吉非替尼可通过 HMGB1/NOXs-ROS/EGFR-MAPKs-AP-1/NF-κB 信号在博莱霉素诱导的肺纤维化中缓解肺纤维化。

　　在本研究中，我们证明了 HMGB1 和α-SMA之间的关系以及吉非替尼（Gefitinib）在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化中的治疗作用。首先，我们证明了 HMGB1 蛋白家族的成员（HMGB34367）可以作为α-SMA 启动子的新转录因子并参与肺纤维化过程。其次，我们发现吉非替尼可有效减少小鼠肺纤维化，这可能与 HMGB1/NOXs-ROS/EGFR-MAPKs-AP-1/NF-κB信号有关。

　　首先，我们专注于 HMGB1 在肺纤维化发展中的作用。HMGB1在纤维化肺组织中高表达，抑制HMGB1可显着减轻小鼠肺损伤。科学家将此现象主要归因于其作为重要炎症因子的作用，而炎症是肺纤维化的关键病理过程。然而，HMGB1 的详细分子机制仍然未知。免疫组化和免疫荧光结果显示HMGB1位于部分间质细胞中，其中α-SMA染色也呈阳性。RT-PCR 分析还显示，α的 mRNA 表达在 BLM 处理后，-SMA 的增加与 HMGB34367 的增强的 mRNA 表达平行。此外，我们发现 HMGB34367通过 DNA-核蛋白 pulldown 方法参与调节α -SMA 的表达。HMGB34367 是一个 20 kDa 的蛋白质，属于一个特定的蛋白质组，大部分与 HMGB1 具有相同的结构。HMGB34367 的全长序列与 HMGB1 蛋白的 1 至 178 个氨基酸区域相同，包括两个 DNA 结合结构域，框 A 和框 B，但缺少 HMGB1 的 179-215 酸性 C 末端尾区。HMGB1 是一种高度保守的核蛋白，可以稳定核小体并允许 DNA 弯曲以促进某些基因转录。总之，我们的研究结果表明 HMGB1 可能主要通过消化成不同形式并促进α-SMA 基因作为转录激活因子的激活和由活化的单核细胞和巨噬细胞分泌并表现为炎症细胞因子。

　　接下来，我们研究了吉非替尼（Gefitinib）对肺纤维化的影响。事实上，吉非替尼减轻肺纤维化的潜力仍然存在争议。哈迪等人证明吉非替尼可以通过降低 EGFR 表达和逆转小鼠的形成性纤维化来明显缓解小鼠的肺纤维化。随后，Ishii 等人发现所有不同口服剂量（20mg/kg、90mg/kg、200mg/kg）的吉非替尼均可抑制小鼠肺纤维化，大剂量吉非替尼不会诱发或加重肺纤维化。然而，铃木等人和李等人表明吉非替尼治疗可显着加重小鼠和大鼠的肺纤维化。此外，一些日本患者报告了与吉非替尼治疗相关的严重肺间质疾病，这意味着吉非替尼可能诱发或加重这种疾病。事实上，对于不同的结果有几种可能的解释。首先，这可能与不同品种的小鼠或大鼠对吉非替尼的反应不同有关，因为它们的遗传特征。其次，不同剂量的吉非替尼是导致矛盾结果的重要因素。较高剂量的吉非替尼可能导致比治疗更多的毒性。第三，不同品种啮齿动物中EGFR的表达和激活及其对不同剂量吉非替尼的反应对促进或抑制肺纤维化的MAPK信号有直接影响。第四，实验期间吉非替尼的给药时间和给药方法也影响了结果。在我们之前的一系列研究中，我们发现吉非替尼明显抑制了博来霉素在纤维化小鼠中诱导的肺胶原沉积和α- SMA 表达。

　　总之，我们全面研究了分子HMGB1的作用，氧化-抗氧化失衡的参与，以及吉非替尼（Gefitinib）治疗下游相关分子转导机制在博来霉素诱导的肺纤维化中的作用。这些结果表明，HMGB1 有助于肺纤维化，吉非替尼主要通过抑制 HMGB1/NOXs-ROS/EGFR-MAPKs-AP-1/NF-κB 信号减弱博来霉素诱导的胶原沉积和过度氧化应激。目前的研究结果有可能从根本上推进我们对肺纤维化分子机制的理解，并可能对设计针对肺纤维化的新型和创新治疗方法产生重要影响。

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