为了更详细地研究法匹拉韦（Favipiravir）对PB1 K229R和PA P653L突变的影响，我们同时表达了携带单个突变或两个突变的重组聚合酶，并使用PB2亚基C末端的蛋白A标签纯化重组聚合酶。所有方法均能形成PB1、PB2和PA比例相等的异源三聚体复合物，如SDS/PAGE所示，然后进行银染或蛋白质免疫印迹分析。
K229R突变体在体外转录过程中显示法匹拉韦（Favipiravir）掺入减少
接下来，我们测量了转录测定中野生型和突变聚合酶的活性，其中32P放射性标记的封端引物在与代表流感病毒启动子.在该测定中，以A-G终止的封端引物，这是细胞培养中流感病毒感染期间首选的引物序列，优先从3′UC（G产物）启动，但也可以从3′U（C产物）.在所有四种核苷酸存在下，对两种产物的总聚合酶活性相加的分析显示，突变型聚合酶和野生型聚合酶之间没有显着差异。
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