miR-34a改变易瑞沙/吉非替尼获得性耐药的机制

　　研究 miR-34a 改变易瑞沙/吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌 (NSCLC) 中 Axl 水平的调控机制。

　　方法

　　qRT-PCR和Western blot检测EGFR突变NSCLC细胞系中miR-34a、Axl、Gas6及相关下游信号蛋白的表达；PC9-Gef-miR-34a 和 HCC827-Gef-miR-34a 细胞是通过用 miR-34a 过表达病毒转染亲本细胞建立的，然后还比较了 PC9 中 Axl、Gas6 和下游通道相关蛋白的表达-Gef-miR-34a 和 HCC827-Gef-miR-34a 和耐药菌株。通过CCK8测定法测量细胞的存活率。荧光素酶报告基因检测 Axl 是否是 miR-34a 的靶标。最后，建立荷瘤裸鼠模型以验证体内miR-34a、Axl和Gas6 mRNA表达之间的关系。

　　结果

　　PC9-Gef和HCC827-Gef细胞系中Axl mRNA和蛋白、Gas6 mRNA和蛋白以及相关下游蛋白的表达水平高于PC9和HCC827亲本细胞系，而miR-34a的表达低于亲本细胞系。它在亲本细胞系中（P < 0.05）。PC9-Gef和HCC827-Gef细胞系中Axl mRNA和蛋白质、Gas6 mRNA和蛋白质以及相关下游信号蛋白的表达高于PC9-Gef-miR-34a和HCC827-Gef-miR-34a细胞中的表达, 过表达 miR-34a (P < 0.05)。

　　结论

　　Axl 的 miR-34a 调控在 NSCLC 获得性易瑞沙/吉非替尼耐药中起重要作用，且它们的表达呈负相关，表明它们可作为 NSCLC 的预后标志物或潜在治疗靶点。

　　尽管 TKI 的使用为部分 EGFR 突变的晚期非小细胞肺癌患者提供了良好的预后，但在临床实践中发现，大多数接受治疗的患者在 9 至 13 个月后出现不同程度的耐药性。获得性耐药的机制尚不完全清楚，目前公认的机制包括EGFR基因（T790M）外显子20的二次突变和MET基因的扩增。最新研究表明，Axl用于控制NSCLC的获得性TKI耐药。Anexelekto (Axl) 是受体酪氨酸激酶亚家族的成员。结合生长停滞特异性蛋白6（Gas6）可以激活其酪氨酸激酶活性并激活下游信号转导通路，参与细胞粘附、增殖、凋亡等过程。虽然已经有一些研究探讨了Axl如何在NSCLC中诱导TKI耐药的机制，但具体机制仍不清楚。

　　在这项研究中，我们主要关注 miR-34a 对 Axl 的调控和下游信号蛋白的表达。一个miRNA可以靶向多种mRNA来调节细胞增殖、分化、凋亡等生物学功能。发现在易瑞沙/吉非替尼耐药细胞系中，亲本细胞和耐药株细胞中miR-34a、Axl和Gas6的表达呈负相关，Axl、Gas6与下游PI3K呈各向同性关系/AKT、MEK/ERK 和 JAK/STAT 相关蛋白。在吉非替尼耐药的细胞系中，当我们用慢病毒过表达miR-34a时，我们发现耐药株中Axl和Gas6的表达明显低于对照组，耐药株对吉非替尼的敏感性增加.当通过esiRNA处理下调Axl时，我们发现下游信号蛋白的表达与对照组相比显着降低，细胞对吉非替尼的敏感性增加。

　　迄今为止，相关研究已发现miR-34a在多种肿瘤和细胞系中异常表达，包括神经母细胞瘤、肺癌和黑色素瘤细胞系。我们使用 Target Scan 生物信息学软件发现 Axl 是 miR-34a 的潜在靶标，进一步的双荧光素酶报告基因检测显示 Axl 是 miR-34a 的靶标。我们通过细胞实验证实了miR-34a和Axl之间的反比关系，然后建立了裸鼠模型。荷瘤裸鼠尾静脉注射表达miR-34a的慢病毒后，发现肿瘤体积较对照组明显缩小；此外，通过免疫组织化学测量，下游途径中相关蛋白质的表达显着降低。结果表明，体内miR-34a的上调可以进一步提高吉非替尼耐药的NSCLC细胞对吉非替尼的敏感性。因此，

　　我们的研究有一些局限性。首先，由于时间限制，没有包括能够研究患者生存和预后的临床标本。二是由于客观原因，案件数量较少。尽管如此，目前的结果首次表明 miR-34a 通过抑制 Axl 在抑制肺癌细胞生长中发挥重要作用。虽然我们推测 miR-34a 可以通过靶向 Axl 来抑制肺癌，但本研究仅分析了一种 miRNA 和一种 mRNA，可能还有其他 miR-34a 靶点或其他 miRNA 影响肺癌肿瘤的生长。因此，需要进一步的研究来证实这一假设。

　　总之，我们研究了 miR-34a 是否调节易瑞沙/吉非替尼耐药细胞系中的 Axl。我们发现失调的 miR-34a 可以通过 Axl 影响 PI3K/AKT、MEK/ERK 和 JAK/STAT 的相关下游信号通路在体外和体内改变 NSCLC 的肿瘤发生和吉非替尼耐药性。因此，miR-34a 不仅可以作为治疗靶点，还可以作为 NSCLC 的预后生物标志物。微信扫描下方二维码了解更多：