使用Tucatinib和曲妥珠单抗或HER2Ab治疗HER2+BCBM细胞的治疗组合。针对肿瘤内和肿瘤间较大异质性的两种或多种治疗方法的组合是赋予癌症患者临床益处的基石。Tucatinib是一种HER2酪氨酸激酶的高选择性抑制剂，目前正在研究治疗HER2+转移性乳腺癌患者的临床试验。因此，我们接下来的目标是在体外确定图卡替尼tucatinib和曲妥珠单抗联合治疗对HER2+BCBM模型的影响。BT474-Br和AU565细胞用曲妥珠单抗(10μg/mL)和/或增加浓度的图卡替尼tucatinib(0至200nM)处理4天。
细胞增殖分析表明，与任一单一疗法相比，曲妥珠单抗和tucatinib的组合显着损害了肿瘤细胞增殖。尽管如前所述，曲妥珠单抗对AU565细胞有中度作用，但我们的结果显示，当连续4天联合使用这两种药物时，抗增殖作用增强。对单独使用纯化的HER2Ab(10μg/mL)或与tucatinib(6.2nM)联合处理的BT474-Br细胞进行的额外增殖分析证实了与曲妥珠单抗相似的对肿瘤细胞增殖的显着抑制。
使用caspase3/7glo检测分析不同时间点的细胞凋亡表明，与对照组相比，图卡替尼tucatinib和曲妥珠单抗联合治疗的BT474-Br细胞显着增加。结晶紫染色进一步表明，与对照相比，BT474-Br和AU565中分别为6.2和12.5nM的曲妥珠单抗(10μg/mL)和图卡替尼tucatinib降低了形成菌落的能力，并且两种药物的组合进一步削弱了这种菌落形成体外能力。
为了评估HER2下游信号和相关信号通路的差异，用曲妥珠单抗、图卡替尼tucatinib或组合处理BT474-Br细胞1、3和6小时，并进行蛋白质印迹。我们在用联合方案处理的细胞中的所有时间点观察到p-Akt(S473)水平的重要下调。与组合相比，Tucatinib也将p-Akt水平降低到较低程度，而与对照细胞相比，曲妥珠单抗处理的细胞中p-Akt水平的降低幅度不大。
与每种药物和未治疗对照的单一疗法相比，这两种药物的组合在6小时后还显着降低了下游p-mTOR(S2481)的磷酸化。我们的结果还表明，在用治疗组合处理的细胞中，p-ERK和p-JNK信号通路的下调。总之，这些结果表明联合使用曲妥珠单抗和图卡替尼tucatinib在靶向转移性乳腺癌细胞中的HER2信号传导方面更有效。详情请扫码咨询：
